免疫组化双标

产品价格： 55.00
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品牌名称：艾普蒂生物

免疫组化双标检测 (IHC Double Staining)

免疫组化双标技术（IHC Double Staining）基于经典的免疫组织化学/免疫细胞化学（IHC/ICC）原理，利用两种特异性标记的抗体，在同一张组织切片、细胞涂片或爬片上，同时原位可视化两种不同的靶抗原（如蛋白质、多肽），精确至亚细胞结构水平。该技术能高效揭示两种抗原在空间上的共定位或互斥关系。

核心优势：

空间共定位分析：单次实验即可揭示两种抗原在细胞或组织中的共存或分布关系。
高效节省样本：避免对同一区域连续切片进行两次单染，最大限度利用珍贵样本。

主要应用：

精确定位与共表达研究：在细胞、亚细胞水平分析两种抗原的表达模式、共定位程度（如受体-配体、信号通路分子）。
复杂病理分析：辅助肿瘤诊断、分型及微环境研究（如肿瘤细胞标记物与免疫细胞浸润标志物共染）。

检测原理：
基于高特异性的抗原-抗体反应。使用两种不同宿主来源或不同标记系统（如不同显色酶/荧光素）的一抗分别识别两种靶抗原。通过对应的二抗及分步显色系统（如DAB产生棕褐色沉淀 + TY试剂产生红色沉淀）实现两种信号的可视化区分。
实验流程 (关键步骤分轮进行)：

第一轮染色 (靶抗原A):

样本预处理 (脱蜡复水、抗原修复)
内源性酶/生物素灭活
血清封闭
孵育一抗A
孵育二抗A (通常标记HRP)
DAB显色 (产生棕褐色信号)
信号洗脱 (温和去除抗体复合物，保留抗原表位)

第二轮染色 (靶抗原B):
再次抗原修复 (可选，视抗原稳定性而定)
内源性酶/生物素灭活 (可选)
血清封闭
孵育一抗B
孵育二抗B (标记与二抗A不同的酶，如AP；或不同荧光素)
显色/检测 (如 TY试剂产生红色信号；或荧光检测)
共同后续步骤:
苏木精复染 (细胞核)
脱水、透明、封片
显微镜镜检与分析 (区分双色信号)

样本要求及运输条件：

石蜡切片：常温运输。
冰冻切片：-80℃保存，干冰运输。
涂片/爬片：必须充分固定，常温运输。

组织样本：需完全固定。组织离体后，应立即置于足量（体积大于组织10-15倍）的合适固定液中固定。固定时间建议：小标本24-48小时，大标本需切开后固定（至少12小时）。固定完全后尽快送检。样本可在常温（约24℃）或冷藏（4℃）下固定，严禁冷冻。固定后的样本需常温运输。
蜡块/蜡头：提供编号清晰的石蜡块或带少量组织的蜡头。双标对样本质量要求更高。

关键注意事项 (尤其涉及客户提供抗体)：

预实验必要性：强烈要求进行预实验！需提供：
正式实验样本 + 预实验样本（预期两种靶抗原均高表达的蜡块/切片）。
阳性对照样本（已知表达这两种抗原）。
抗体配对要求 (核心)：
提供两种一抗的准确信息（名称、品牌、货号、宿主种属），务必确认两者宿主种属不同（如兔抗A + 小鼠抗B），或使用不同标记系统的同种属一抗（需特殊方案）。
接收时确认抗体体积（建议每种≥10μl）及保存温度。
若一抗来源特殊或需特定二抗系统，需客户提供匹配的二抗；常规二抗由我司提供。
显色系统选择：常用 DAB (棕褐色) + AP-Red (红色) 组合。需确认抗体兼容性及显色顺序。
预实验流程：
预实验结果由客户确认双色效果（特异性、信号强度、背景、交叉反应）是否满意。
我司可提供专业建议，但不对最终正式实验结果作保证。
预实验后请尽快（建议3周内）反馈。
适用范围确认：同一抗体组合用于不同种属或不同组织器官时，均需重新进行预实验验证。
结果趋势：正式实验的结果趋势（如表达强弱、共定位程度）不受预实验保证。双标技术复杂度更高，结果受多种因素影响。